Skip to content.
Открыть корзину  |  Очистить корзину
 
Hispanlab/Laboratorios Conda (Испания) Aгар для определения ДНК-азы (дезоксирибонуклеазы)
 


Производитель:    Hispanlab/Laboratorios Conda (Испания)
Цена:    $ 63.33
  • Dnase Test Agar :: Aгар для определения ДНК-азы (дезоксирибонуклеазы)
  • Для детекции дезоксирибонуклеазной активности в микроорганизмах, особенно в патогенных стафилококках
Состав (г/л)
Дезоксирибонуклеиновая кислота2,0
Казеиновый пептон15,0
Соевый пептон5,0
Натрия хлорид5,0
Агар15,0


Конечное значение рН 7,3 ± 0,2

Приготовление

Суспендируйте 42 г среды в одном литре дистиллированной или деионизованной воды. Если необходимо, добавьте 10 г маннита и 0,025 г бромтимолового синего. Тщательно перемешайте, чтобы получить гомогенную суспензию. Нагрейте при постоянном помешивании и прокипятите одну минуту. Стерилизуйте автоклавированием 15 минут при 118-121°С. Охладите до 45-50°С и разлейте в чашки Петри.

Чтобы подготовить кровяную среду, добавьте 5% крови к среде без маннита.

Использование

Сделайте обильный штрих (2 см длиной) тестового микроорганизма (например, стафилококки, Pseudomonas, Serratia, Bacillus, и т.п.) по поверхности среды. Одновременно на одной чашке можно исследовать 4-5 различных образцов. Инкубируйте от 18 до 24 часов при 35°С.

После развития хорошего бактериального роста добавьте каплю 1N соляной кислоты или несколько капель 0,1% раствора толуидина синего. Для некоторых штаммов необходимо увеличить концентрацию HCI до 2N, чтобы получить хорошую положительную реакцию, которой считается появление хорошо определяемого светлого прозрачного гало вокруг бактериального штриха.

При реакции разбавленной соляной кислоты с дезоксирибонуклеиновой кислотой (ДНК), содержащейся в культуральной среде, образуется мутный осадок.

С другой стороны, колонии микроорганизмов, продуцирующих дезоксирибонуклеазу, будут окружены прозрачной зоной или гало, содержащим фракции растворимых нуклеотидов из расщепленной ДНК, при реакции которых с соляной кислотой не образуется осадка.

Результаты

В присутствии соляной кислоты:
ДНКаза - положительные: прозрачная зона, окружающая зону посева, остальная часть чашки остается непрозрачной.
ДНКаза - отрицательные: отсутствие прозрачного гало вокруг зоны посева.

В присутствии толуидина синего:
ДНКаза - положительные: появление розового гало, окружающего зону посева. Осталь-ная часть чашки - синяя.
ДНКаза - отрицательные: отсутствие розового гало, окружающего зону посева.

Для формирования положительной реакции необходимо приблизительно 5 минут.

Среда очень богата питательными веществами, и большинство микроорганизмов растут на ней хорошо. Тем не менее, для некоторых требовательных микроорганизм может быть необходимо добавление крови. В присутствии крови, добавление разбавленной соляной кислоты приводит к образованию непрозрачного, но хорошо определяемого гало вокруг колоний ДНКаза-положительных микроорганизмов. (Среда - непрозрачная).

DNAse Test Agar с кровью не следует использовать в исследовании гемолитических реакций. Weckman и Catting (1957), Disalvo (1959) и Fusillo и Weis (1959) доказали, что коагулаза-положительные стафиллококки расщепляют ДНК гидролизом и считаются ДНКаза-положительными.

 
© 2004 PBV Limited
Разработка ЗАО «ДОРИС»